一、研究对象
选择年7月至年7医院行胸腔镜下食管部分切除术或胃镜检查后经病理确诊的食管癌患者82例，包括ESCC72例，食管腺癌8例，食管神经内分泌癌2例。胸腔镜下食管部分切除术中共获取病理组织30份，其中低分化8份、中分化9份、高分化13份。纳入标准：①年龄≥18岁，组织病理学确诊为食管癌；②全身状况良好，无糖尿病、高脂血症等代谢性疾病和感染性疾病；③近2个月内未服用过抗生素、抑酸药和益生菌等影响食管菌群的药物；④无特殊饮食习惯；⑤无严重肝、肾功能不全和免疫缺陷。排除标准：①近2个月内曾使用过影响食管微生态的药物；②合并自身免疫病；③既往或当前存在食管癌以外的其他肿瘤；④临床资料不全；⑤医师认为不适宜入组。医院胃镜检查结果无异常的20名健康体检者作为健康对照。本研医院伦理委员会审核批准(KS)，所有患者均签署知情同意书。
二、研究方法
1．标本采集：
食管癌患者空腹6～8h后行胃镜检查，检查前以温开水漱口，取4～8块食管肿瘤组织，对其中2块组织标本进行标记后置于-80℃保存，剩余组织常规保存于5%甲醛组织固定液。采用上述相同方法采集健康对照者的胃镜下食管黏膜组织。胸腔镜下食管部分切除术组织标本离体后立即于-80℃保存。按照纳入标准选取适宜样本用于后续研究。
2．DNA提取和16SrRNA扩增子焦磷酸测序：
采用PowerMaxDNA提取试剂盒(美国MoBioLaboratories公司)提取样本DNA，以NanoDropND-分光光度计(美国ThermoFisherScientific公司)检测样本DNA的数量和质量，并于-20℃保存备用。
对16SrRNAV4区域行PCR扩增，正向引物序列为5′-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3′，反向引物序列为5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′。反应体系：25μL高保真PCR预混液；引物各3μL(10μmol/L)；10μLDNA模板；6μL双蒸水。循环参数：98℃预变性30s；98℃变性15s，58℃退火15s，72℃延伸1s，25个循环；72℃终延伸1min。PCR产物采用AMPureXPBeads(美国BeckmanCoulter公司)纯化，以PicoGreen双链DNA定量检测试剂盒(美国Invitrogen公司)量化。运用IlluminaHiSeq测序平台(双端测序，2端×bp；美国Illumina公司)测序，由上海宝藤医学检验中心完成。
3．操作分类单元(operationaltaxonomicunit,OTU)聚类分析和物种注释：
应用Vsearch2.4.4软件将物种序列分组为OTU，去除重复序列、聚类和嵌合体，以97%相似度聚类。通过Silva数据库(